自 2018 年 8 月非洲豬瘟首次在中國發(fā)現(xiàn)以來,一年多來非洲豬瘟給養(yǎng)豬業(yè)造成幾乎毀滅性的打擊,市民們深感菜籃子中豬肉之沉重,豬價及生豬產(chǎn)業(yè)的發(fā)展多次出現(xiàn)在國家領(lǐng)導(dǎo)人的關(guān)注之下。各種鼓勵養(yǎng)豬政策不斷出臺,各大研究院所專家及集團企業(yè)發(fā)布了諸多的復(fù)養(yǎng)方案,復(fù)養(yǎng)方案中豬場生物安全的建設(shè)都會提高到最為重要的環(huán)節(jié),然而在針對非洲豬瘟壓力下,消毒劑的選擇還存在不少謬誤,筆者就非洲豬瘟壓力下豬場的消毒劑選擇作一論述。
1. 非洲豬瘟病毒的特點
非洲豬瘟(ASF)是由非洲豬瘟的病毒(ASFV)感染家豬和野豬引起的一種烈性傳染病。非洲豬瘟病毒在脂質(zhì)溶劑、洗滌劑、氧化劑里面很容易失活,比如次氯酸鹽和苯酚。如 ASFV 與 2.3% 的氯和3% 的鄰苯基苯酚,或者合成的碘溶液接觸 30min 就會失活。其他使ASFV 失活的有效措施包括福爾馬林、氫氧化鈉等??傊试硭?、洗滌劑、堿性物質(zhì)對畜舍、器具、衣物、工具、人類居所等消毒非常有效。飛機上的消毒劑推薦使用衛(wèi)可。被病毒污染的飼料、飲水和肥料應(yīng)被掩埋或焚燒。被 ASFV 污染豬糞可用 1% 氫氧化鈉或氫氧化鈣4 ℃處理 3 min 或 0.5% 濃度處理30 min。ASFV 在 pH 4 ~ 10 的溶液中比較穩(wěn)定,但在 pH 小于 4 或大于 11.5 的條件下,并且培養(yǎng)基中不含血清會立刻失活 ;在 25% 的含有血清的培養(yǎng)基,且 pH 為 13.4的條件下可以存活數(shù)天 ;5 ℃的血清中可以存活 6 年以上。非洲豬瘟病毒對溫度敏感,在 60 ℃的條件下持續(xù) 30 min,或者 56 ℃持續(xù)70 min 都能滅活 ;在豬的糞便中保持感染性能達到數(shù)周,在腐敗的血液中可存活 15 周,在室溫保存的血清或血液中可存活 18 個月。
總之,ASFV 是有囊膜病毒,沒有有機物保護是很容易被滅活,但在有機物保護下,該病毒對環(huán)境及消毒劑抵抗力又變得很強大,養(yǎng)殖場環(huán)境中 ASFV 總是被有機物保護,消毒劑選擇必須考慮到這一點。
2 消毒的定義及效果影響因素
2.1 消毒與滅菌的區(qū)別
消毒與滅菌是不同數(shù)量級的清除殺滅微生物的概念。
消毒是指殺滅或去除外環(huán)境中各種病原微生物,目標是達到無害化的過程。正常消毒的標準要求是微生物滴度降低量達到 103 量級就可以,即消毒的結(jié)果是殺滅或者清除微生物達到 99.9% 就是符合消毒要求。若用消毒對象污染的自然微生物的殺滅率來評定消毒效果,一般以殺滅或清除率達到 90% 為合格。
滅菌是指殺滅或去除外環(huán)境中一切微生物(包括且不限于病原微生物)的過程。因此目前國際上規(guī)定,滅菌過程必須使滅菌物品污染的微生物的存活概率降低到 10-6。而針對非洲豬瘟這個特定疫病的危害嚴重性,顯然常規(guī)的消毒標準是不適合的,針對非洲豬瘟病毒的殺滅要力爭采用滅菌級的標準。
2.2 消毒效果的幾個影響因素
2.2.1 化學(xué)消毒劑的特性
1)化學(xué)消毒劑的種類
消毒劑的選擇必須針對要處理或者消滅的微生物的特點來確定,例如細菌芽孢或者非囊膜病毒必須選用滅菌級消毒劑,選用低效消毒劑(單鏈季銨鹽)效果就很差。非洲豬瘟病毒為有囊膜病毒,在沒有有機物保護的裸病毒時很容易被季胺鹽類滅活,10% 癸甲溴銨稀釋3200 倍,20 ℃,作用 10 min 病毒滴度降低 3.6 Log。 2)消毒劑的配方優(yōu)異的消毒劑配方能顯著提高消毒效果。復(fù)方消毒劑的代表產(chǎn)品是衛(wèi)可(Virkon? S),其主要成分是過硫酸氫鉀復(fù)合物能產(chǎn)生生物殺滅劑——高活性氧 ;偏磷酸鹽能中和硬水中的金屬離子 ;烷基苯磺酸鈉起到表面活性劑作用,濕潤消毒物體表面 ;蘋果酸能降低 pH,增效生物殺滅劑 ;氨基磺酸降低 pH,氧化因子和氯化鈉通過化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生氯化因子,綜合具有“氧化、氯化、酸化”三合一功效,并佐劑成分有效去除了有機物和硬水的影響,有效性的顏色指示劑。復(fù)配后成效顯著 :殺菌譜廣,性質(zhì)穩(wěn)定,速效,可在低溫下使用,不易受有機物、酸、堿及其他物理、化學(xué)等因素的影響,對金屬器械無腐蝕,無毒無殘留,溶于水能飲用。 3)消毒劑的濃度劑量消毒劑的濃度劑量是操作過程中的基本條件之一。首要是保障消毒劑的劑量,在配比濃度時一般都是以有效成分凈含量來進行配比,不正規(guī)生產(chǎn)企業(yè)標簽中往往有陷阱,導(dǎo)致配比濃度往往達不到應(yīng)有比例。
2.2.2 外界因素
1)環(huán)境溫度
總所周知,大部分消毒劑隨著溫度的降低,活性下降,溫度越高消毒劑效率越好。溫度高低對消毒效果的影響,往往隨消毒方法、化學(xué)成分及微生物種類不同而不同。例如,戊二醛在低溫的使用效果就不如在高溫的使用效果,因此低溫季不建議使用戊二醛。
2)環(huán)境相對濕度
氣霧噴霧消毒和熏蒸消毒受環(huán)境相對濕度的影響十分明顯,環(huán)境中的濕度過大會降低消毒劑的濃度,直接導(dǎo)致消毒劑效果失效。例如甲醛熏蒸消毒的最佳相對濕度為80% ~ 90%。
3)消毒劑的作用時間
國標中評價消毒劑的作用時間一般為 30 min,可是現(xiàn)場操作中往往達不到 30 min,直接導(dǎo)致消毒劑對微生物的殺滅效果下降,例如部分消毒池人經(jīng)過時不到 1 min,這種即時接觸是達不到效果的,而對這方面的研究國內(nèi)還較少。
4)消毒時環(huán)境的酸堿度
酸堿度的變化對消毒的效果影響很大 :一方面部分消毒劑只有在特定的酸或堿環(huán)境中才有效 ;另一方面酸堿環(huán)境中微生物的存活強度也不同。例如 ASFV 在 pH 4 ~ 10的溶液中比較穩(wěn)定,但在 pH 小于 4或大于 11.5、不含血清的培養(yǎng)基中ASFV 會立刻失活。
5)表面活性和稀釋用水的水質(zhì)
在使用表面活性劑消毒時應(yīng)格外小心,例如陰離子表面活性劑會影響單鏈季銨鹽類的消毒作用 ;例如部分地區(qū)的硬水(水中含鈣、鎂離子高)等也容易消耗消毒劑的消毒成分。
6)有機物質(zhì)類的干擾
養(yǎng)豬場的環(huán)境中會殘留大量的有機物,例如蛋白質(zhì)、尿液、血液、油脂等物質(zhì),這類物質(zhì)不但是微生物的保護傘,還會消耗化學(xué)消毒劑,容易使消毒劑與有機物質(zhì)產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng),導(dǎo)致消毒效果的下降。例如普通的氯制劑、季銨鹽及過氧化物類的消毒劑受有機物干擾比較明顯,醛制劑受有機物的影響相對較小。因此,在消毒前,建議先做消毒對象表面的清理和清潔工作,清除消毒對象的表面有機物和生物膜。同時要注意選擇消毒劑有效性測試時的模擬現(xiàn)場的有機物的環(huán)境。
7)滲透性
消毒環(huán)境的表面往往是凹凸不平的,而且還存在大量的縫隙,作為消毒劑必須要能夠滲透到所有消毒物品的表面,達到消毒的全方位。不同消毒劑的滲透性不同,例如用作熏蒸時甲醛蒸汽比環(huán)氧乙烷穿透力差。優(yōu)秀的消毒劑必須具備很強的滲透有機物表面的能力。
8)消毒設(shè)備在實際的畜牧生產(chǎn)過程中,消毒都是借助消毒設(shè)備來實現(xiàn)。消毒設(shè)備對消毒效果的影響主要是,噴霧霧滴的大小,霧滴的懸浮時間,一般來說,霧滴越小,懸浮時間越長,和有害微生物的接觸時間越久,消毒效果就越好。
9)微生物種類特性和數(shù)量級
因為不同微生物的自身特性對不同類型的消毒劑的抗性也不同,因此消毒劑選擇還要考慮環(huán)境中的主要微生物的種類和數(shù)量級,污染嚴重和高數(shù)量級的環(huán)境必須選擇高效的消毒劑。
3 非洲豬瘟壓力下豬場消毒劑選擇要點
3.1 殺滅非洲豬瘟病毒的消毒劑概述
世界動物衛(wèi)生組織(Office International Des Epizooties OIE) 建議對 AFSV 可使用 0.8% 氫氧化鈉、2.3% 次氯酸鹽、0.3% 福爾馬林、3% 鄰苯基苯酚和碘混合物進行消毒,但均需作用 30 min 可滅活病毒。農(nóng)業(yè)農(nóng)村部推薦的防控非洲豬瘟的消毒劑見表 1。
3.2 非洲豬瘟壓力下選擇消毒劑的要點
3.2.1 注重消毒“藥”的概念
不同的消毒“ 藥 ” 對 ASHV殺滅比例也存在著極大差異,非瘟壓力下選擇消毒“藥”也需要根據(jù) ASFV 的特點選擇有效的產(chǎn)品。 除了有效外還要考慮殺滅的程度,據(jù)中國獸醫(yī)協(xié)會編寫的《 非洲豬瘟知識手冊 》, 國外有實驗室用高毒力或中等毒力的 ASFV 感染豬只后,血液中最高病毒滴度可達 109HAD50/mL,口腔液、尿液和糞便中最高滴度可達 105HAD50/mL。另有研究表明,水是非??焖俚母腥就緩?,在水里面含量只要有一個 TCID50 就會引起感染。因此對防控 ASFV 飲水消毒不能是有效,而是要滅菌級。
3.2.2 注重“用藥量”的概念
上面所提到消毒劑需要合理的配比比例,確保有效的問題 ;對于現(xiàn)場用量來說,還需要考慮豬舍的空間和面積,例如空舍消毒按地面面積 ×2.5 作為整棟舍的面積,墻 面、天花板、地面的消毒藥的用量 為 300 ml/m2, 噴霧消毒 40~80 ml/m2(注意消毒霧滴大?。?。
3.2.3 綜合各方面因素,準確用“藥”
從表 2 可以看出針對非洲豬瘟病毒,消毒劑的種類不同、使用劑量、作用時間、環(huán)境溫度及有機物污染等,造成病毒滴度降低量差異顯著,生產(chǎn)上可根據(jù)消毒的對象和目的,選擇合適的比例。如人穿雨鞋在腳踏盆消毒,考慮有機物干攏,如停留時間短于 1 min,可以選擇1∶100 衛(wèi)可 ;如停留 10 min,則可按 1∶800 稀釋。另 ASFV 在有機物存在下抗力增強,所以在消毒前清洗就更為重要。
3.2.4 高效消毒劑定義有別于養(yǎng)豬生產(chǎn)中高效的消毒劑
化學(xué)消毒劑可分為高效、中效和低效消毒劑。高效消毒劑能殺滅包括細菌芽孢和真菌孢子在內(nèi)的外界環(huán)境中的各種微生物的消毒劑,又稱滅菌劑。例如,在化學(xué)消毒劑的劃分上,醛類是高效消毒劑,因為 2% 戊二醛 30 min 可以殺滅破傷風(fēng)的芽孢 ;針對非洲豬瘟病毒,某醛制劑產(chǎn)品(12.74% 戊二醛 +4.84% 癸甲氯銨)在 20 ℃、1%有機物中加磷酸緩沖液(pbs)作用 30 min,稀釋比例為 1∶50,非洲豬瘟病毒滴度降低量為 4.6 log。如生產(chǎn)中使用國內(nèi)常見的一種 2% 的稀戊二醛則濃度理論上至少應(yīng)該為1∶8 稀釋,而且非復(fù)方的顯然影響滅活效果。因此高效消毒劑只是代表其主要成分,在生產(chǎn)實踐中還因考慮多種因素。
3.2.5 要了解產(chǎn)品主要成分和特性,避免盲目使用
生產(chǎn)中要了解產(chǎn)品性能,除了對 ASFV 有效,同時要根據(jù)表 3 避免用刺激性強的消毒劑進行帶豬消毒,若使用不當(dāng)會刺激豬的眼睛、呼吸道黏膜,豬的呼吸道黏膜受損會讓 ASFV 更容易入侵豬體。
3.3 豬場消毒工作前要進行清理和清潔工作
由于豬舍存在如灰塵、糞便、尿液及血液等大量有機物,這些有機物大大提高了非洲豬瘟病毒對環(huán)境的抗性,消毒前使用專用的泡沫清洗劑有利于提高消毒效果。
4 非洲豬瘟消毒效果評價
中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸醫(yī)研究所編制《非洲豬瘟防控清潔消毒技術(shù)要點》,列出非洲豬瘟消毒效果評價方案。
1)設(shè)置消毒指示微生物評價消毒效果
消毒前,將枯草桿菌芽孢涂于棉布或紗布,作為消毒指示微生物,置于待消毒場所。消毒結(jié)束后,檢測芽孢殺滅率。殺滅率達到 99.9%以上,判定消毒合格。
枯草桿菌芽孢抗性是強于朊病毒(瘋牛病病原)以外的所有微生物,非洲豬瘟病毒是有囊膜病毒,對消毒劑抗力較弱,故可以枯草桿菌芽孢作為消毒指示微生物評價滅殺非洲豬瘟病毒的效果。
2)檢測非洲豬瘟病毒評價消毒效果
消毒后,在養(yǎng)殖場、交易市場、屠宰場、無害化處理場點、疫區(qū)臨時檢查站點等高風(fēng)險場所,采集樣品,并進行非洲豬瘟病毒的檢測。針對病毒消毒效果的評價方法主要包括分子生物學(xué)評價法和細胞培養(yǎng)評價法,養(yǎng)殖場只能采用分子生物學(xué)評價法,但由于被滅活病毒的核酸有可能檢測出陽性,存在假陽性現(xiàn)象。
3) 采用哨兵豬來評價消毒成效
恢復(fù)生產(chǎn)前,可以選擇 10 ~20 頭非洲豬瘟陰性健康的豬,作為“哨兵”,進場自由活動 30d,并每天觀察臨床癥狀,采集樣品進行檢測,確保豬場消毒徹底衛(wèi)生。
2008 年 FAO / OIE /世界銀行發(fā)布了針對養(yǎng)殖業(yè)的生物安全(Biosecurity) 的定義是 :為降低病原體傳入和散布風(fēng)險而實施的措施。生物安全的中心思想是隔離、消毒和防疫。應(yīng)用到非洲豬瘟防控的方案就是隔離和消毒,消毒需要根據(jù)現(xiàn)場環(huán)境和消毒劑等綜合因素進行考慮,選擇好消毒劑,規(guī)范使用 ,才能建立起針對非洲豬瘟的生物安全網(wǎng)。
(參考文獻:略)